Servicios de Seguridad in vitro

Atendiendo a los requisitos legales del Reglamento1223/2009, Invitrotecnia -área in vitro del grupo Lab&Clin Alliance– le ofrece la mejor oferta de ensayos in vitro adaptados a las características de cada sustancia catalogada como cosmético, ya sea materia prima o fórmula final.

Cumpliendo con el apartado 8 de la parte A del Anexo I del Reglamento, la muestra es pre-evaluada conforme a sus características y a las indicaciones proporcionadas por el fabricante, para adaptar la fase experimental posterior.

El análisis de la toxicidad local es realizado a partir de las conclusiones de los expertos del área de Regulatoria del grupo Lab&Clin Alliance, incluyendo únicamente los ensayos necesarios para el activo o producto.

Los estudios de irritación a nivel cutáneo y ocular, de sensibilización cutánea y de toxicidad fotoinducida, en el caso de que el ingrediente o producto absorba UV, se realizan siguiendo las directrices del “Scientific Committee on Consumer Safety” (SCCS) en su 9ª Edición y bajo Buenas Prácticas de Laboratorio (BPLs), auditando protocolo, desarrollo e informe final del estudio, tal y como exige la normativa internacional, para su correcta comercialización.

 
 

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Irritación dérmica

“SKINETHIC PROTOCOL”

  • OECD1 nº 439
  • EURL-ECVAM2 “Skin Ethic™ Skin Irritation Test-42 bis”; DB-ALM Protocol 135
1. Organisation for Economic Co-operation and Development
2. European Union Reference Laboratory for alternatives to animal testing

La irritación dérmica se define como el daño reversible de la piel tras la aplicación de la sustancia de ensayo durante 4 horas, realizado antiguamente en modelo animal (conejo). Actualmente se dispone de epidermis humanas reconstituidas que permiten llevar a cabo el estudio in vitro. Siguiendo la 9ª Guía del SCCS, tras realizar el estudio caso por caso de cada sustancia a evaluar, ésta se somete al ensayo in vitro de Irritación dérmica cuando no ha podido ser clasificada como corrosiva.

Para analizar el posible daño que una sustancia pueda ejercer a nivel tópico, ésta se incuba sobre epidermis humanas reconstituidas, durante 42 minutos, seguido de un tiempo de post-incubación de 42 horas. El potencial irritante se determina cuantificando su efecto citotóxico mediante el ensayo del MTT.

Irritación ocular

Los ensayos de irritación ocular han sido desarrollados para analizar los cambios producidos en la superficie anterior del ojo, tras aplicación de la sustancia a evaluar.
Debido a que no existen por el momento métodos alternativos validados, el SCCS propone una batería de ensayos ex vivo e in vitro. Sabiendo que sólo es necesaria la evaluación de las sustancias sobre las que no existan datos previos, así como las que tengan un pH entre 2 y 11.5, que son consideradas como corrosivas sin necesidad de realización de ningún ensayo, Invitrotecnia ha realizado una comparación entre los test más demandados, confirmando que el más fiable es el HET-CAM.

En este ensayo, la sustancia se aplica directamente sobre la membrana corio-alantoidea (CAM) de huevos de gallina, durante 5 minutos, según dos aproximaciones: “Tiempo de aparición de reacciones”, en el caso de sustancias transparentes, y “End Point”, en el caso de sustancias turbias u opacas. El potencial irritante de los productos se calcula según los cambios que ocurren (lesiones vasculares).

“HET-CAM”

EURL-ECVAM1 Protocolos nº 47 y nº 96.

1. European Union Reference Laboratory for alternatives to animal testing

Sensibilidad dérmica

Un sensibilizante dérmico es aquella sustancia que puede provocar una respuesta alérgica tras el contacto dérmico. Los mecanismos químicos y biológicos que subyacen al proceso de sensibilización se inician con un evento molecular que deriva en una dermatitis de contacto alérgica.

El primer evento molecular clave es la unión covalente de sustancias electrofílicas a centros nucleofílicos de las proteínas de la piel; el segundo evento ocurre a nivel de queratinocitos e incluye respuestas inflamatorias; el tercer evento es la activación de las células dendríticas, identificables por la expresión de marcadores de superficie celular específicos, quimioquinas y citoquinas; por último, el cuarto evento es la proliferación de células T.

El h-CLAT es el método propuesto en base al tercer evento. En este ensayo, la sustancia se incuba con células de línea humana “THP-1”, durante 24 horas.
El potencial sensibilizante se determina mediante la cuantificación por citometría de flujo de la expresión de los marcadores de superficie celular CD86 y/o CD54.

“h-CLAT”

OECD1 GUIDELINE FOR THE TESTING OF CHEMICALS. DRAFT PROPOSAL FOR A NEW TEST GUIDELINE. “In Vitro Skin Sensitisation: human Cell Line Activation Test (h-CLAT). December 2015”.

1. Organisation for Economic Co-operation and Development.

Fototoxidad

La evaluación del potencial fototóxico de una sustancia se realiza cuando ésta absorbe en el espectro UV.

El ensayo validado “3T3 Neutral Red Uptake Phototoxicity test” está basado en la comparación de la citotoxicidad de un compuesto cuando es analizado en presencia y en ausencia de una dosis no citotóxica de luz UVA.

Para inferir el potencial fototóxico inducido por la acción combinada de una sustancia y la luz ultravioleta (UV), ésta se incuba con células de línea murina “3T3” durante 1 hora, seguido de irradiación con luz UVA.

La capacidad fotocitotóxica del compuesto se determina mediante la comparación de la concentración que reduce la viabilidad celular del cultivo expuesto a la sustancia e irradiado al 50% (EC50) frente a la EC50 del cultivo expuesto a la sustancia sin irradiar.

“3T3-NEUTRAL RED UPTAKE”

OECD1 nº 432.

EURL-ECVAM2 “3T3-Neutral Red Uptake (NRU) Phototoxicity Assay”; DB-ALM Protocol 78.

1. Organisation for Economic Co-operation and Development
2. European Union Reference Laboratory for alternatives to animal testing

Absorción dérmica

El proceso de absorción dérmica es un término general que describe el paso de las sustancias a través de la piel. Se divide en tres procesos: penetración (entrada de un compuesto en el estrato córneo), permeación (paso de una capa a otra funcional y estructuralmente diferente a la anterior) y reabsorción (entrada de la sustancia al sistema vascular).

Los factores que influyen en este proceso, son entre otros, la naturaleza lipófila de la sustancia y su concentración, el grosor y la composición de las capas de la piel, la duración de la exposición y la cantidad de producto aplicado tópicamente.

El objetivo de los estudios de absorción dérmica in vitro es la obtención de información cualitativa y/o cuantitativa en condiciones normales de uso. Los datos cuantitativos pueden utilizarse para el cálculo del MoS (Margen of Safety).

El ensayo consiste en un sistema de dos cámaras, de difusión vertical, separadas por una membrana de características similares a las de la piel, que permite evaluar el paso de moléculas de una cámara a otra. El método de cuantificación debe ser compatible con la sustancia de análisis.

“SKIN ABSORPTION: IN VITRO METHOD”

OECD1 nº 428.

1. Organisation for Economic Co-operation and Development